怎么测定唾液淀粉酶的最适ph
唾液淀粉酶(pancreaticamylase)是由唾液腺分泌的一种水解酶,而淀粉经唾液中淀粉酶的水解,生成糊精和麦芽糖。而知道唾液淀粉酶的最适ph对于自身有好处,那么唾液淀粉酶的最适ph是多少呢,又应该怎么测定唾液淀粉酶的最适ph?
在底物过量的条件下,相同时间内,在温度、酶浓度相同的条件下,接近最适 pH 的反应体系中消耗淀粉的量最大,剩余淀粉与过量碘液生成的颜色越浅,吸光度越小,利用分光光度计测出各管的吸光度后, 取处于升高与降低趋势之间的较小吸光度范围对应的 pH 值即为唾液淀粉酶的最适 pH。
一、 材料与方法 仪器:吸量管(5mL,1mL) ,试管,试管架,小烧杯, 722 型分光光度计,恒温箱,吸耳球 试剂:0.01mol/L 碘液,0.2mol/L 磷酸氢二钠,0.2mol/L 磷酸二氢钠,淀粉溶液,唾 液,蒸馏水
二、方法:相同时间内,在温度、酶浓度相同、pH 不同的条件下,酶的活度不同,水解的淀粉量不同,剩余的淀粉与过量碘液生成的颜色不同,通过在660nm测量吸光度,得出酶的最适 pH 范围。
操作步骤:
1、唾液的获取:蒸馏水漱口后在口中含蒸馏水,适宜时间后将蒸馏水连同唾液一同放置于事先准备好的容器中即可,在实验过程中应注意酶的失活,为了防止此现象发生应将此液体置于冰水中冷却。
2、不同pH缓冲液配制:根据下表配置各个pH值的缓冲溶液各10ml
3、淀粉用量的确定(为了更好观察颜色变化,可以加入适量蒸馏水使总体积相同。混匀,观察现象,并选择颜色变化适中一支,记录其用量。)
4、酶液稀释倍数确定(为了更好观察颜色变化,可以加入适量蒸馏水使总体积相同,混匀,观察现象,并选择适中一支,记录其稀释倍数。)
5、最适pH确定(蒸馏水调零,测定660nm处吸光度A,最后以A为纵坐标,pH为横坐标作图,取曲线最低点对应的pH值,即为唾液淀粉酶的最适pH值。)
从上述的实验中或许可以得出6.8为曲线最低点对应的pH值,即为唾液淀粉酶的最适pH值。但是需要注意的是淀粉酶的测定结果受方法的影响较大,怎么测定唾液淀粉酶的最适ph?不同方法参考值亦有所不同,临床所用方法也较多,因此必须了解所用测定方法和其参考值,才能作出正确的诊断。
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